標準化生物實驗室的技術(shù)規(guī)范準則之儀器操作

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生物實驗室傷害以及與工作有關(guān)的感染主要是由于人為失誤、不規(guī)范的實驗技術(shù)操作以及儀器使用不當造成的。以下簡要介紹生物實驗室規(guī)范操作技術(shù)和方法。

1、移液管和移液器

　　使用移液管和移液器時應(yīng)注意:①使用移液管時應(yīng)使用吸球或定量移液器；②移液管應(yīng)帶有棉塞以減少移液器具的污染；③為減少氣溶膠的產(chǎn)生，應(yīng)避免向含有感染性物質(zhì)的溶液中吹入氣體，避免將移液管中的液體用力吹出，刻度移液管不需要排出后一滴液體；④污染的移液管需*浸入盛有消毒液的防碎容器中消毒至規(guī)定時間。盛放廢棄移液管的容器應(yīng)放在生物安全柜內(nèi)；⑤打開封口瓶子時應(yīng)使用移液管的工具，避免使用皮下注射針頭和注射器；⑥為避免感染性物質(zhì)從移液管中滴出而擴散，在工作臺面應(yīng)放置浸有消毒液的布或吸有消毒液的紙，使用后按感染性廢棄物處理；⑦在每階段工作結(jié)束后，必須采用適當?shù)南緞┣宄ぷ鲄^(qū)的污染。

　　2、微生物接種環(huán)

　　要求直徑2～3mm并*封閉，柄的長度小于6cm以減小抖動。使用封閉式微型電加熱器消毒接種環(huán)，或使用一次性接種環(huán)。

　　3、生物安全柜

　　使用生物柜應(yīng)注意:①須具有生物安全柜書面規(guī)章、使用操作說明或安全手冊；②生物安全柜應(yīng)在運行正常時使用，所有工作必須在工作臺面的中后部進行；③安全柜內(nèi)應(yīng)盡量少放置器材或標本，避免任何物品阻擋安全柜內(nèi)前后的空氣格柵，避免影響安全柜后部壓力排風系統(tǒng)的氣流循環(huán)；④盡量減少操作者身后的人員活動，避免操作者手臂在安全柜里反復(fù)移出和伸進，以防干擾安全柜氣流；⑤在安全柜內(nèi)的工作開始前和結(jié)束后，安全柜的風機應(yīng)至少運行5分鐘；⑥實驗完成后以及每天工作結(jié)束時，應(yīng)使用適當?shù)南緞ι锇踩竦谋砻孢M行擦拭；⑦在生物安全柜內(nèi)操作時，不得進行文字工作。

　　4、離心機、勻漿器、組織研磨器、搖床、攪拌器和超聲處理器

　　避免氣溶膠及標本的溢出，保證儀器正常運行是使用這些儀器的基本原則。

　?。?）離心機:離心機運行操作、離心管標本裝量與配平、離心機維護等內(nèi)容見第二章常用儀器設(shè)備安全使用。操作具有生物危害的樣本時，需要特別注意:①離心桶的裝載、平衡、密封和打開必須在生物安全柜內(nèi)進行。操作危險度Ⅲ級和Ⅳ級的微生物，必須使用可封口的離心桶（安全杯）。②應(yīng)每天檢查離心機內(nèi)轉(zhuǎn)子部位的腔壁是否被污染，以評估離心操作規(guī)范。每次使用后，要清除離心桶、轉(zhuǎn)子和離心機腔的污染。

　?。?）勻漿器、組織研磨器、搖床、攪拌器和超聲處理器:使用以上儀器時應(yīng)注意:①使用專門提供實驗室用的以上儀器。確認儀器運轉(zhuǎn)正常。②由于玻璃可能破碎而釋放感染性物質(zhì)并傷害操作者，建議使用塑料容器，如聚四氟乙烯（PTFE）容器。③用勻漿器、搖床和超聲處理器時，應(yīng)該用結(jié)實透明的塑料箱覆蓋設(shè)備，并在用完后消毒。可能的話，這些儀器可在生物安全柜內(nèi)覆蓋塑料罩進行操作。④使用玻璃研磨器時要求戴手套并用吸收性材料包住。建議使用塑料研磨器。⑤操作結(jié)束后，應(yīng)在生物安全柜內(nèi)打開容器。⑥超聲處理器操作人員應(yīng)采取聽力保護措施。

　　5、冰箱

　　實驗室冰箱應(yīng)明確其規(guī)定用途。使用中應(yīng)注意:①冰箱、低溫冰箱和干冰柜應(yīng)當定期除霜和清潔，應(yīng)清理出所有在儲存過程中破碎的安瓿和試管等物品。清理時應(yīng)戴厚橡膠手套并進行面部防護，清理后要對內(nèi)表面進行消毒。②儲存在冰箱內(nèi)的所有容器應(yīng)當清楚地標明內(nèi)裝物品的科學名稱、儲存日期和儲存者的姓名。未標明的或廢舊物品應(yīng)當高壓滅菌并丟棄。③應(yīng)當建立凍存物品清單④除非有防爆措施，否則冰箱內(nèi)不能放置易燃溶液。冰箱門上應(yīng)明確標示。

　　6、玻璃器皿和銳器

　　實驗室中盡可能用塑料制品代替玻璃制品。必須使用玻璃器皿時只能用實驗室級別的玻璃，任何破碎或有裂痕的玻璃制品均應(yīng)丟棄。實驗過程中不得將注射針作為移液管使用，減少使用注射器和針頭。如必須使用注射器和針頭時，采用銳器安全裝置。嚴禁重新給用過的注射器針頭戴護套。實驗中盡量用巴斯德塑料吸管代替玻璃吸管。

　　7、裝有凍干感染性物質(zhì)安瓿開啟與儲存

　?。?）安瓿開啟:安瓿開啟應(yīng)在生物安全柜內(nèi)進行，開啟前消毒安瓿外表面。用砂輪在安瓿凍干物遠端中部銼一痕跡，取酒精浸泡的棉花將安瓿包起來以保護雙手，然后手持安瓿從標記的銼痕處打開。小心移去安瓿頂部，如果安瓿內(nèi)裝有棉花，用消毒鑷子除去。棄去物均按污染材料處理。緩慢向安瓿中加入液體來重懸凍干物，避免出現(xiàn)泡沫。

　?。?）安瓿儲存:裝有感染性物品的安瓿不得浸入液氮中，以避免有裂痕或密封不嚴的安瓿在取出時破碎或爆炸。建議將感染性物品真空冷凍干燥，儲存于-80℃冰箱或干冰中。從冷藏處取出安瓿時，實驗室人員應(yīng)當進行眼睛和手的防護。

　　8、感染性物品的操作

　　（1）血樣采集:由受過培訓(xùn)的人員采集病人或動物血樣。采集靜脈血時，使用一次性安全真空采血管取代傳統(tǒng)的針頭和注射器。所有操作均必須戴手套。裝有標本的試管應(yīng)置于二級容器中運至實驗室，并在實驗室內(nèi)部轉(zhuǎn)運。檢驗申請單應(yīng)當分開放置在防水袋或信封內(nèi)，接收人員不應(yīng)打開這些袋子。

　?。?）血清分離:操作人員需經(jīng)過嚴格培訓(xùn)。操作時應(yīng)戴手套以及眼睛和黏膜的保護裝置。實驗操作中避免或盡量減少氣溶膠的產(chǎn)生。血液和血清應(yīng)小心吸取，不得傾倒。嚴禁用口吸液。帶有血凝塊等廢棄標本管，加蓋后放于防漏容器內(nèi)高壓滅菌。操作前應(yīng)準備相應(yīng)種類的消毒劑，用于及時處理可能噴濺和溢出的標本。

　　（3）涂片、蓋玻片、組織及組織切片:用于顯微鏡觀察的血液、唾液、尿液、糞便、分泌物和骨髓標本在固定和染色時，不必殺死涂片上的所有微生物和病毒。所使用的載玻片、蓋玻片、染色及洗液等廢棄物均應(yīng)按污染物進行處理，并經(jīng)相應(yīng)消毒液浸泡或高壓滅菌后再丟棄。組織標本應(yīng)用甲醛或多聚甲醛固定。應(yīng)當避免冷凍切片。如果必須進行冷凍切片，應(yīng)當使用安全罩，操作者要戴安全防護面罩。清除污染時，儀器溫度要求升至20℃。

　?。?）朊蛋白（prion）相關(guān)組織:操作過程必須在生物安全柜中進行，在生物安全柜的工作臺面使用一次性防護罩。實驗人員必須穿戴一次性防護、服（隔離衣和圍裙）和手套，病理學家應(yīng)戴特制的具有鋼絲網(wǎng)的兩層橡膠手套。盡可能地使用一次性塑料器具，使用儀器設(shè)備，不與其他實驗室共用儀器。

　　含有朊蛋白的組織標本暴露于96％甲酸1小時可以基本失活。實驗廢棄物，包括一次性手套、隔離衣和圍裙，均應(yīng)當采用多孔負荷蒸汽滅菌器在134～137℃高壓滅菌18分鐘一個循環(huán)，或高壓滅菌3分鐘六個循環(huán)，然后再焚燒。

　　朊蛋白的感染性廢液應(yīng)當用終濃度含20g/L有效氯的次氯酸鈉處理1小時。污染的生物安全柜和其他表面可以采用含20g/L有效氯的次氯酸鈉處理1小時來清除污染。不能高壓滅菌的用具可以反復(fù)用含20g/L有效氯的次氯酸鈉潤濕超過1小時來進行清潔，并要求用水沖洗以清除殘留的次氯酸鈉。

　　操作朊蛋白相關(guān)組織還應(yīng)注意:①鋼絲網(wǎng)手套由于不是一次性用品，必須進行污染物的清除。②朊蛋白對紫外線照射也具有抵抗力。雖然甲醛不能有效降低標本中朊蛋白感染性，但安全柜仍必須用標準方法來清除污染（如甲醛蒸氣），以滅活可能存在的其他微生物因子。③HEPA過濾器摘除后需要在至少1000℃的溫度下焚燒。